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基因敲除小(大)鼠


       唯尚立德拥有成熟高效的TALEN及CRISPR/Cas9基因敲除技术平台、完善的模式生物构建平台,完美整合从载体设计、构建、活性鉴定、基因突变动物模型建立等各个环节。现推出小鼠、大鼠等模式生物基因敲除技术服务,为客户提供周期短、性价比高的模式生物构建服务。至今未曾失败过,我们郑重承诺失败将全额退款。


TALEN靶向敲除基因原理简介

       TALE技术(Transcription activator-like effectors)是一种崭新的分子生物学工具。科学家发现,来自植物细菌Xanthomonassp的TAL蛋白的核酸结合域的氨基酸序列与其靶位点的核酸序列有恒定的对应关系。利用TAL的序列模块,可组装成特异结合任意DNA序列的模块化蛋白。TALEN(Transcription activator-like effector(TAL) nucleases)技术是基于TALE与人工改造的核酸内切酶的切割域(FokI)构建针对任意特定核酸靶序列的重组核酸酶。通过TAL的DNA识别域结合到靶位点上,及FokI切割域形成二聚体后,可特异性对目标DNA序列实现切断。在随后的非同源末端连接修复过程中,断开的DNA双链会由于碱基的随机增减从而以一定的概率实现目标基因功能的缺失。




CRISPR/Cas9靶向敲除基因原理简介
       CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一种由RNA指导Cas核酸酶对特定基因序列进行DNA修饰的技术。CRISPR/CRISPR-associated(Cas)是细菌和古细菌一种不断进化适应的免疫防御机制。在这系统中,CRISPR对特定DNA的识别是由crRNA或向导RNA通过碱基互补配对,定向寻找目标DNA序列。靶定目标序列后,Cas9蛋白负责对目标DNA进行剪切,造成靶DNA双链断裂。在随后的非同源末端连接修复过程中,断开的DNA双链会由于碱基的随机增减从而以一定的概率实现目标基因功能的缺失。


TALEN/CRISPR构建基因敲除小(大)鼠技术流程图

服务流程及周期




流程及周期图


步骤内容
周期
打靶质粒构建
设计不同靶点,SNP检测,组装TALEN质粒2-3对,或3条gRNA,检测TALEN的SSA活性或gRNA活性
1个月


得到Founder选择活性较高的打靶质粒,体外转录成mRNA,显微注射受精卵,胚胎移植到代孕母鼠子宫,3周后出生,2周龄基因型鉴定。数量:至少2只2-3个月
得到F1代杂合子2个月后性成熟,Founder和野生型小鼠交配,3周后出生,2周龄基因型鉴定,获得稳定传代的基因突变杂合子F1代。数量:2个lines、至少2只/line(性别随机,若甲方要求一雌一雄,如果第一批F1代小鼠都是同性别,则进行第二次交配,每次交配到生出需3个月,依此类推,直至一雌一雄。)3-4个月


我们的优势
1、我们已经具有4000多对TALEN质粒、CRISPR/Cas9系统构建和活性验证的成功经验,大量的技术经验使我们能准确、快速地构建出具有体内活性的TALEN和CRISPR/Cas9质粒。
2、我们具有强大的售前和售后技术支持团队,可以为客户提供免费专业的技术支持和方案设计及拓展。
3、我们已经成功使用TALEN及CRISPR/Cas9系统为客户提供了上百例成功案例,囊括家蚕、斑马鱼、小鼠、大鼠等突变体,至今未曾失败过,我们的服务受到了客户的一致认可。
4、价格低、周期短。我们高效专业的技术平台使得我们能在最短的时间内完成模式生物的构建服务。较短的时间使得我们能够大大的节约成本,为客户提供价格最低的服务