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转基因小(大)鼠


       唯尚立德拥有12000多个独特的(不重复的)人类ORF克隆,所有的ORF克隆都经过全长测序确定,基本上涵盖了所有的已知基因。基于此文库提供的转基因动物构建服务,大大提高了载体构建的效率和准确度。

技术原理简介
       转基因小鼠是指将一段外源基因随机整合到小鼠基因组中,获得过表达该目的基因的小鼠模型。唯尚立德采用PiggyBac转座子系统实现表达目的基因转基因鼠的构建,PiggyBac转座子是一种通过“剪切&粘贴”式机制在载体和基因组间进行高效移动遗传元件的系统。在转座时,转座酶可以特异性的识别位于转座子载体两端的反向末端重复序列(ITR),并有效的将ITR将其之间的序列从转座载体上原有的位置剪切下来,然后高效的整合进染色体上的TTAA位点。



PiggyBac构建转基因小(大)鼠技术流程图


优点:

    效率高

    传代率高

    系统稳定


服务流程及周期


服务流程及周期图

步骤   
内容   
周期
转基因元件获得客户提供或全基因合成根据实际情况而定
转基因质粒构建将转基因元件构建到转基因质粒pPiggy载体上 2-4周
构建转基因小鼠Founder显微注射受精卵,胚胎移植到代孕母鼠子宫,3周后出生,2周龄基因型鉴定。数量:至少2只3-5个月


转基因小(大)鼠类型
1、过表达转基因小(大)鼠

       构建上述常规的带有启动子和目的基因的表达载体,利用原核显微注射的方法将表达载体注射到小鼠受精卵中。通过构建广泛性/组织特异性/诱导性等不同的启动子,实现转基因在小鼠组织广泛性/特异性/特定条件下等的表达,达到对目的基因功能的研究目的。

2、RNAi转基因小(大)鼠

       通常采用U6/H1驱动shRNA表达,设计靶序列构建shRNA载体,利用原核显微注射的方法将shRNA载体注射到受精卵中。在基因表达的过程中,通过shRNAi的干扰作用,达到对目的基因表达的沉默抑制,实现基因功能的研究。

3、随机插入式条件性过表达小(大)鼠

      将构建的广泛表达启动子-LoxP-Stop-LoxP-转基因载体通过显微注射制备组织特异性转基因小(大)鼠模型,转基因在正常情况下并不表达,只有与相应的组织特异性表达Cre/CreERT2小鼠杂交后,因Stop终止序列在特定的组织中被去除,从而达到转基因在诱导性/特定组织中特异性表达的目的。