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条件性过表达小(大)鼠


技术原理简介
       条件性过表达小(大)鼠的构建主要是通过Cre/LoxP重组系统来实现的。该系统是位点特异性重组酶系统,已发展成为在体内、外进行遗传操作的有力工具。其可以使靶基因的表达或缺失发生在试验动物发育的某一阶段或某一特定的组织器官。此外,若与控制Cre表达的其他诱导系统相结合,还可以对某一基因同时实现时空两方面的调控。通过构建带有广泛表达启动子-LoxP-Stop-LoxP-目的基因的条件性调控表达框架,通过显微注射制备在特定位点,如Rosa26, H11等位点,带有条件性调控表达框架的敲入小(大)鼠模型,转基因在正常情况下并不表达,只有与相应的组织特异性表达的Cre/CreERT2小鼠杂交后,因Stop终止序列在特定的组织中被去除,从而达到转基因在诱导性/特定组织中特异性表达的目的。



Rosa26或H11位点的优势:
    表达Pattern稳定: 定点敲入构建过表达,不像随机插入基因组的转基因,表达特异性和表达量(expression pattern)稳定
    表达Pattern不受上下游DNA元件影响: Rosa26 or Hipp11(H11)无影响基因特异表达的调控元件,不会影响敲入的启动子的表达Pattern

TALEN/CRISPR构建条件性敲除小(大)鼠技术流程图


服务流程及周期




服务流程及周期图


步骤   
内容   
周期
转基因元件获得客户提供或全基因合成根据实际情况而定
Cas9/gRNA的合成和同源模板(Donor)构建合成Cas9/gRNA,检测Cas9/gRNA活性,构建同源模板质粒2个月
得到FounderCas9/gRNA体外转录成mRNA和Donor质粒共同显微注射受精卵,胚胎移植到代孕母鼠子宫,3周后出生,2周龄基因型鉴定。2-3个月
得到F1代杂合子 2个月后性成熟,Founder和野生型小鼠交配,3周后出生,2周龄基因型鉴定,获得稳定传代的基因突变杂合子F1代。3-4个月