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点突变小(大)鼠


       在目的基因上引入点突变,对于疾病模型的建立具有重大的意义,如候选点突变是基因疾病相关的人类基因SNP,对目标基因的候选位点进行点突变,若动物模型上再现了该疾病的性状,则建立的小鼠模型可以为精准治疗提供模拟人类疾病的动物模型。


技术原理简介
       基因点突变(Point Mutation)是指通过TALEN/CRISPR技术在靶基因的目的位置引进特定的突变。通过针对靶基因的待突变位点设计相应的打靶质粒,并且根据需要点突变的位置构建含点突变的Donor质粒,将Donor质粒与打靶质粒共同显微注射进小鼠的受精卵中,TALEN/CRISPR定位到基因组上的靶序列并切割双链DNA,在随后的修复过程中,细胞以含同源序列的Donor质粒为模版修复基因组DNA,最终获得在目的DNA序列引进点突变的小鼠。

 TALEN/CRISPR构建定点敲入小(大)鼠技术流程图


服务流程及周期


服务流程及周期图:


步骤内容   
周期
敲入元件获得 客户提供或全基因合成根据实际情况而定
Cas9/gRNA的合成和同源模板(Donor)构建合成Cas9/gRNA,检测Cas9/gRNA活性,构建同源模板质粒 2个月
得到FounderCas9/gRNA体外转录成mRNA和Donor质粒共同显微注射受精卵,胚胎移植到代孕母鼠子宫,3周后出生,2周龄基因型鉴定。2-3个月
得到F1代杂合子 
2个月后性成熟,Founder和野生型小鼠交配,3周后出生,2周龄基因型鉴定,获得稳定传代的基因突变杂合子F1代。 3-4个月