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基于siRNA的高通量筛选


产品简介
      RNAi技术是一种新型的基因沉默工具,可简单、快速、特异地分析特定基因的细胞功能。其工作原理如下:在内源蛋白复合物(RISC)的作用下,双链RNA分子可以通过碱基互补配对原则而降解目标靶基因的信使RNA(mRNA),从而达到沉默靶基因表达水平的目的。在全基因范围,筛选与确认特定细胞行为的功能基因已成为药物化学、生命科学研究已经应用的常规手段。基于SiRNA全基因组文库的高通量筛选技术,可平行分析成千上万条基因的功能,大大加快研究进程,从而能迅速、全面地鉴定出细胞过程或信号传导途径的相关候选基因,以及疾病相关的药物靶基因,保证研究成果更为系统、新颖。

常规孔板筛选

      常规的siRNA筛选是基于384或96微孔板,采用一般转染siRNA的方法或者反式转染方法将siRNA导入细胞进行高通量的细胞功能筛选。其中反式转染法由于操作方便,时间较短,常被高通量筛选采用。简单讲,预先将siRNA文库里各条siRNA分别与转染试剂混合,转移到384微孔板中,然后将培养好的细胞接种到微孔板里,细胞被转染siRNA。经过48-72小时的培养,蛋白表达水平沉默后,通过高通量的微孔板读数仪或高通量的扫描显微镜读出孔板里的细胞信号。若这些细胞信号与参照细胞相比发生了变化,则认为相应的siRNA与研究的细胞过程相关,从而鉴定出相关的候选基因。


传统siRNA筛选示意图

   
微孔板筛选虽然简单明了,使用方便,适合于100-500个基因范围的筛选。

 但是当筛选库容量增大时,孔板筛选的成本将大大提高。比如,全基因组2万个基因,若重复三次筛选,需做6万次转染、分析,因此使用的siRNA、转染试剂、以及后续检测用的抗体和底物需要量特别大。


SAMcel芯片
       除了传统的孔板筛选服务外,我们针对大规模筛选需求,成功开发出先进的SAMcell(Self-Assemble Microcell)细胞芯片技术,在玻璃盖玻片上,细胞自组装形成细胞岛点阵,极大地提高了筛选通量。同时采用反向转染技术,简化了筛选过程,同时大大减少筛选中使用的SiRNA和相应试剂的用量。



       SAMcell技术示意图:在芯片上点印siRNA或miRNA,接种细胞后,细胞自组装形成细胞岛点阵,同时siRNA或miRNA自动转染到对应的细胞小岛,最后通过高内涵图像扫描系统成像,分析实验结果。

       细胞岛间无交叉污染:在20x20mm的盖玻片上,细胞在自组装形成点阵的同时转染表达GFP的质粒,细胞小岛间隔形成荧光点阵,而相邻的细胞小岛(没有转染GFP质粒)则没有荧光信号。

技术特点:
 1. 筛选通量极大提高。
 2.操作简单,只需要像传统的细胞培养操作一样加入细胞,细胞自组装自转染,使得大规模筛选十分方便。
 3.验平行性好,稳定性提高100倍,所有细胞小岛在同样的培养环境,避免384孔板间实验条件差别。
 4.成本是现有筛选技术的十分之一,  SiRNA、转染试剂及检测抗体用量都大大降低。
 

文库筛选

   人类全基因组siRNA文库(约20000个基因,每个基因3条siRNA)预制于384孔板里   
   人类激酶siRNA文库(约700个基因,每个基因3条siRNA)预制于96孔板里   
   人类G蛋白偶联受体siRNA文库(约400个基因,每个基因3条siRNA)   
   人类miRNA模拟体/抑制剂文库(约1000个miRNA)    
   小鼠miRNA模拟体/抑制剂文库(约600个miRNA)   
   大鼠miRNA模拟体/抑制剂文库(约500个miRNA)   


细胞综合实验订单表Ver1.0

  

筛选平台张博士热线:13401083138,信箱:sale-6@v-solid.com