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Cas9 核酸内切酶(Cas9 DNA endonuclease)


 
1U/ ul
 
-20℃
反应条件 
37℃温育

货号

规格

价格

#E025S

20U

800

#E025L

100U

3200


应用
    Cas9/gRNA特异位点体外剪切DNA,如plasmids、genomic DNA, PCR product
    体外检测gRNA的剪切靶点DNA的效率
    Cas9蛋白结构与功能研究


概述
CRISPR/Cas是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御,可特异剪切外源的病毒及DNA以对抗入侵。 人工改造过的Cas9/gRNA系统通过gRNA(short guide RNA)引导Cas9蛋白识别并剪切带有gRNA靶点的双链DNA,用于基因敲除和精确编辑DNA等操作。


来源:

重组Cas9

反应条件:

1×Buffer [20 mM HEPES,pH 7.5,150mM KCl,10 mM MgCl2,0.1 mM EDTA,0.5 mM DTT],37℃温育。

质保声明:

Cas9经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。请使用前务必仔细阅读本手册。

单位定义:

在50 μl反应体系中,37℃,gRNA足量时,1U等于1h能将1 ug 质粒或线性DNA完全酶切所需的Cas9蛋白量。


注意事项
1.Cas9切割dsDNA效率与gRNA靶点序列有关,每个gRNA的效率都会不同。
2.所用枪头管子等都必须是RNase free的,gRNA可以适当多加,防止因为部分降解而降低酶切效率。

Cas9体外酶切法检测gRNA靶点效率实验步骤
1、带有gRNA靶点的质粒或PCR扩增出的DNA片段,gRNA靶点最好不位于PCR片段中央,这样将切割出两条大小不同带便于判断。
2、gRNA靶点设计与体外转录准备见唯尚立德cas9/gRNA质粒构建试剂盒。
3、反应体系:


dsDNA
200 nM
gRNA(体外转录)100 nM
Cas90.5-1U
10XBuffer2 ul
ddH2Ox ul
Total20ul
充分混合后,37℃反应1h,65℃煮5min, 跑琼脂糖凝胶电泳检测分析酶切结果


琼脂糖凝胶电泳检测分析酶切结果。



使用限制:本试剂仅限用于科学研究。


储存与安全
    本品4℃运输,储存于-20℃,有效期12个月。长期储存请置于-80℃。
    本品采用蓝冰运输,蓝冰在使用前在-80℃冷冻至少72小时。实验证明,使用上述方法运输,即使到货时蓝冰已经融化,泡沫塑料盒中的温度仍然能保持在4℃或4℃以下24小时。比较干冰运输的产品,其活性和稳定性无任何差异。产品纯化整个过程都在4℃进行,且其贮存液经过优化,对保持酶活的稳定性起到重要作用。产品中含有50%甘油,可以使酶在-35℃下保持液态,若使用干冰运输,酶将被冷冻,发生反复冻融可能会导致酶活性下降。


Cas9体外酶切法检测gRNA靶点效率试剂盒